摘要
一种基于ACTR3 42位赖氨酸发生二羟基异丁酰化低修饰的银屑病小鼠模型构建方法,包括:第一步,通过体外转录的方式,获得Cas9mRNA和guideRNA,通过合成获得oligo donor DNA;第二步,将第一步中获得的Cas9mRNA、guideRNA和oligo donor DNA,显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵雄原核中,将注射后的受精卵移植到假孕母鼠的子宫中,20天左右出生的小鼠为F0代小鼠,通过PCR扩增及测序对其进行基因型鉴定;第三步,将经过鉴定的F0代阳性小鼠与C57BL/6J小鼠交配,繁育获得F1代小鼠,通过PCR扩增及测序对其进行基因型鉴定获得F1代阳性小鼠即可稳定遗传的ACTR3K42A点突变的杂合子小鼠;而F1代阴性小鼠即可作为野生型小鼠;第四步,将第三步中获得的ACTR3K42A点突变的杂合子小鼠进行咪喹莫特诱导获得银屑病小鼠模型。
技术关键词
小鼠模型构建方法
野生型小鼠
银屑病
咪喹莫特乳膏
二羟基
引物
赖氨酸
序列
涂抹
HE染色
位点
脱毛
子宫
显微镜
基因
皮损
试剂盒