摘要
本发明公开了一种抗肝癌药物筛选细胞模型及其构建方法和应用。该模型的构建方法包括:1)将EGFP基因融合到Coilin基因的C端,并构建到CMV‑MCS‑EGFP‑PGK‑Puro慢病毒载体上,得到表达Coilin‑EGFP的病毒载体;2)将病毒载体与病毒包装质粒共染到受体细胞中进行病毒包装,将收取的含有病毒的细胞培养液离心,得到含表达Coilin‑EGFP的病毒上清液;3)用含表达Coilin‑EGFP的病毒上清液侵染肝癌细胞系HCCLM3,筛选稳定表达Coilin‑EGFP的细胞株。该应用为所得细胞模型用于筛选抗肝癌药物。本发明通过选取合适的内切酶,酶切效率高,得到表达Coilin‑EGFP的病毒载体的滴度高,应用于抗肝癌药物筛选,可以直接在荧光显微镜下观察Coilin‑EGFP凝聚体的定位,简单,直观,操作方便,有利于筛选抑制Coilin‑EGFP的细胞核定位的化合物小分子药物。
技术关键词
病毒载体
筛选抗肝癌药物
细胞模型
细胞培养液
质粒
基因
肝癌细胞系
荧光显微镜
培养基
体细胞
琼脂糖凝胶电泳
包装
去离子水
切片
引物
分子
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