摘要
本发明公开了一种肾小球系膜区病理性IgA沉积小鼠模型的构建方法及应用,属于生物技术领域,本发明包括如下步骤:步骤1、gRNA设计;步骤2、Donor载体构建、凝胶回收、连接与转化、菌落筛选、阳性克隆质粒提取、酶切鉴定和测序、注射用质粒制备;步骤3、gRNA合成;步骤4、RNP复合物制备;步骤5、受精卵准备;步骤6、原核显微注射;步骤7、代孕鼠准备及胚胎移植;步骤8、F0代小鼠鉴定;步骤9、转基因小鼠繁殖与建系。本发明方法从模拟IgAN的发病机制出发,为筛选能够分解系膜区免疫复合物沉积的药物、探究早期IgA清除机制,以及采用生物学方法清除异常沉积的IgA从而达到治疗IgA肾病的研究提供一种简单易行的动物模型。
技术关键词
小鼠模型
IgA肾病
转基因小鼠
动物模型
复合物
绒毛膜促性腺激素
质粒提取试剂盒
整合外源基因
回收试剂盒
倒置显微镜
注射针
培养箱
培养基
溶液
凝胶
胚胎
载体
小规模