一种基于CRISPR/Cas9构建miR-181a-2敲除小鼠动物模型的方法及其应用

本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9构建miR‑181a‑2敲除小鼠动物模型的方法及其应用，属于转基因技术领域。本发明设计了特异性靶向非编码基因miR‑181a‑2的两条sgRNA，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的sgRNA 1和如SEQ ID NO.5所示的sgRNA 4，结合Cas9蛋白进行双向敲除，获得了稳定繁殖的miR‑181a‑2敲除小鼠品系。实验结果表明，本发明提供的敲除方法在制备小鼠模型中未发生脱靶，具备精确、高效、简便的优势。利用该敲除品系构建了口腔癌模型，缩短了造模时间，降低研究成本，在科研效率和成果转化方面具有显著优势，为口腔癌相关治疗提供极大的便利。