一种基于HPV16基因反向插入小鼠模型的构建方法及其应用

本发明公开了一种基于HPV16基因反向插入小鼠模型的构建方法及其应用，属于动物模型技术领域。本方法利用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术，在C57BL/6J小鼠Klf5基因座实现HPV16序列的定向敲入。其步骤包括：(1)设计合成特异性gRNA；(2)构建靶向载体Donor vector；(3)显微注射：将Cas9蛋白、gRNA和靶向载体Donor vector混合制备成RNP注射复合物，显微注射入小鼠受精卵中并送回到代孕鼠输卵管中培育后代，以产生基因敲入小鼠。该动物模型能够模拟HPV持续感染导致的宫颈癌前病变进程，为宫颈癌发生机制研究及抗HPV药物筛选提供可靠的实验基础。