摘要
本发明属于细胞技术领域,公开了一种BCL‑2突变型B7H6‑CAR‑T细胞与维奈托克协同治疗小细胞肺癌的动物模型的构建方法,该方法包括:小鼠的选择;细胞系和培养条件;慢病毒载体的生成和制备;人T细胞的转导;重复刺激实验;流式细胞术;Western blot分析;通过定量PCR分析B7H6;转录组RNA测序;体外CAR‑T细胞毒性实验;动物模型;统计分析。本发明开发了抗B7H6CARs,以评估其在体外和异种移植模型中单独及与维奈托克联合针对SCLC的抗肿瘤效果。抗B7H6CARs显示出针对B7H6表达SCLC细胞的特异性活性。为了对抗维奈托克的不良影响,工程化了维奈托克耐药的CAR‑T细胞。维奈托克在体外和体内均协同增强了CAR‑T细胞介导的SCLC细胞凋亡,突出了维奈托克与维奈托克耐药CAR‑T细胞联合作为B7H6表达SCLC疗法的潜力。
技术关键词
CAR‑T细胞
维奈托克
突变型
动物模型
体外细胞毒性检测
嵌合抗原受体
表达绿色荧光蛋白
定量PCR分析
肺癌
白细胞
肿瘤坏死因子
慢病毒载体
检测试剂盒
小鼠
干扰素
外周血
细胞系
抗体