一种引物与探针的设计方法

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种引物与探针的设计方法。本技术方案前置PTCD预测并由此筛选出候选扩增子区，有效避免了二级结构对引物结合的阻碍，提高扩增效率和灵敏度。同时，引入一系列PTCD与引物探针互作性的参数阈值，弥补了引物探针设计的缺失环节，设计在不同模板背景下的普适性和特异性。该方法适用于检测不同种属的基因表达、基因突变。此外，流程设计的标准化使其能够与CRISPR技术、单细胞测序、NGS等新技术结合，具有广阔的技术拓展空间。本技术方案通过优化引物和探针设计，规避了靶标核酸的二级结构，围绕PTCD，突破了引物探针设计的瓶颈，显著提高了多重qPCR和dPCR的扩增效率和检测灵敏度，具有重要的技术创新性和应用价值。