一种基于液滴微流控的EV膜蛋白单分子检测方法及其应用

本发明公开了一种基于液滴微流控的EV膜蛋白单分子检测方法及其应用。本发明首先构建得到抗体、Linker、Linker连接DNA、能被RNA酶特异性切割的RNA和用于启动信号扩增的模板DNA依次连接的Ab‑oligo复合物；接着使用CD9/CD63/CD81功能化磁珠捕获血浆中的细胞外囊泡；在细胞外囊泡中加入Ab‑oligo复合物和封闭缓冲液，孵育，去除未结合的Ab‑oligo复合物后加入RNA酶进行孵育酶切，收集用于启动信号扩增的模板DNA，进行微滴式数字PCR分析，实现对EV膜蛋白的单分子分析。本发明首次通过Linker建立抗体与寡核苷酸的一一对应关系，将单个蛋白信息转化为单条核酸链信息，实现EV膜蛋白单分子检测。本发明操作简单，就能对EV单个膜蛋白进行定性、定量检测，有利于进一步研究EV膜蛋白与疾病的关系。