一种基于Cre-ES细胞系统的条件性基因敲除/敲入动物模型构建方法

本发明涉及一种基于Cre‑ES细胞系统的条件性基因敲除/敲入动物模型构建方法。首先，从组织特异性Cre工具鼠囊胚建立稳定表达Cre重组酶的胚胎干细胞系（Cre‑ES），其核型正常率≥85%、Cre基因稳定整合，且囊胚注射后嵌合率达100%、出生率＞20%。利用该细胞系，通过电转将含loxP位点的基因编辑载体（如靶向ROSA26的loxP‑Stop‑loxP报告系统）导入细胞，经G418筛选获得阳性克隆后，注射至ICR受体囊胚，直接获得F0代基因编辑动物。所述F0代动物基因型为flox/flox且携带Cre重组酶，无需与工具鼠交配即可实现组织特异性编辑。本发明将传统4代繁育周期缩短至1代，效率提升70%，成本降低50%，并解决品系混杂、Cre泄漏表达及标记基因残留问题，适用于时空特异性基因功能研究和疾病模型构建。