一种共享序列介导的增强型单管巢式多重PCR检测方法及应用

本发明公开了一种共享序列介导的增强型单管巢式多重PCR检测方法及应用，所述方法包括：利用多对5’端修饰有相同共享序列的特异性引物(F1/R1～Fn/Rn)进行第一轮靶标扩增，生成含共享序列的中间产物；采用与共享序列完全一致的单一增强引物FR进行第二轮扩增，显著提升检测灵敏度。该方法创新性地通过共享序列实现单管巢式多重PCR，全程封闭操作避免污染，且可同步检测3‑10种靶标。该方法在数字PCR系统中可实现小于10拷贝/μL的绝对定量，特别适用于血流感染病原体和耐药基因的高灵敏度同步检测。本发明兼具多重PCR的高通量和巢式PCR的高灵敏度，在感染性疾病诊断和耐药基因筛查领域具有重要应用价值。