一种基于RPA-CRISPR/Cas12b技术的水稻白叶枯病菌快速检测方法

本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12b的水稻白叶枯病菌快速检测方法。所述试剂组合包含特异性RPA引物对和sgRNA，其序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。检测方法包括：以待测样本核酸为模板，利用所述引物对进行RPA恒温扩增；将扩增产物与sgRNA、Cas12b蛋白及荧光报告分子混合孵育，激活Cas12b的反式切割活性；通过检测荧光信号判断结果。本发明通过将优化的RPA与CRISPR体系集成于离心微流控芯片，实现了全流程闭管化、自动化检测，可在30分钟内完成，灵敏度达0.156 pg/反应，对Xa、Xap等5种近缘菌无非特异性反应，对XOO3亚型具有高灵敏度，但对XOO2亚型不适用，具有快速、灵敏、特异且设备依赖度低的优点，适用于田间、口岸等现场环境的非诊断性检测。