一种基于RPA-CRISPR/Cas12b技术的玉米内州萎蔫病菌快速检测方法

本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12b技术的玉米内州萎蔫病菌快速检测方法，属于核酸检测技术领域。为解决现有RPA等技术存在的扩增子污染风险高、操作繁琐等问题，本发明提供了一种特异性试剂组合、试剂盒及检测方法。所述试剂组合包括序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的RPA引物对及序列如SEQ ID NO.3所示的sgRNA。所述方法包括：以待测样本核酸为模板进行RPA扩增，再将扩增产物与sgRNA、Cas12b蛋白及荧光报告分子混合孵育，通过检测荧光信号判断结果。本发明通过将优化的RPA与CRISPR体系集成于离心微流控芯片，实现了全流程闭管化、自动化检测，可在30分钟内完成，检测灵敏度达1E2 copies/T，极大降低了气溶胶污染的风险，适用于口岸检疫及田间现场快速检测。