一种检测牛布鲁氏菌、分枝杆菌的双重荧光定量PCR方法

本申请涉及定量PCR领域，提出了一种检测牛布鲁氏菌、分枝杆菌的双重荧光定量PCR方法，包括：确定引物探针序列；基于引物探针序列构建双重荧光定量PCR反应体系，并进行PCR扩增；基于模版梯度稀释过程中多种因素优化过程中Ct值的变化情况确定协同影响系数；基于梯度稀释后荧光定量PCR反应过程中因素之间的协同影响作用确定协同波动权重；分别基于牛布鲁氏菌OMP25基因以及分枝杆菌Mpt83基因构建质粒；基于协同波动权重确定质粒梯度稀释后荧光定量PCR反应过程中反应效率校正结果；分别对质粒梯度稀释结果进行灵敏性检测、重复性检测。本申请通过对模版标准曲线的校正，提高PCR数据的准确度。