摘要
本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9敲除鸡EphrinA2基因的细胞系的构建方法,包括如下步骤:设计特异性靶向鸡源EphrinA2基因的sgRNA;构建含有Cas9蛋白基因和特异性靶向鸡源EphrinA2基因的sgRNA的敲除质粒;对细胞进行转染,利用CRISPR‑Cas9系统达到基因沉默,随后通过亚克隆获得鸡源EphrinA2敲除细胞。本发明获得鸡源EphrinA2基因敲除的细胞模型,不仅方法成本低、效率高、简单易用,并且所构建的敲除鸡EphrinA2基因细胞系细胞活性显著降低,为解析EphrinA2在鸡体内中的功能作用及其在某些病毒入侵宿主中的作用与机制提供帮助。
技术关键词
细胞系
CRISPR‑Cas9系统
编码Cas9蛋白
互补链
质粒
Cas9基因
单克隆
转染试剂
编辑系统
细胞模型
序列
载体
启动子
病毒
机制
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