一种小立碗藓全基因组CRISPR/Cas9敲除质粒文库及其构建和应用

本发明公开了一种高效、简便的小立碗藓全基因组CRISPR/Cas9敲除质粒文库及其构建和应用，属于生物技术领域。基于小立碗藓T2T基因组序列，利用生物信息学工具精准预测敲除靶点，并设计双sgRNA以提高敲除准确性和效率，同时降低脱靶风险；通过合成双sgRNA‑pool芯片、扩增、回收、连接载体及转化等步骤，成功构建了操作简便、高通量的小立碗藓CRISPR‑Cas9敲除质粒文库。在双sgRNA设计过程中，采用先进工具提高预测准确性；文库构建后，还包括严格的质检步骤，确保文库质量。本发明不仅为小立碗藓基因编辑提供新途径，也为其他多拷贝、高重复序列生物基因编辑提供借鉴，在解决脱靶问题、提高编辑效率和准确性方面效果显著，对功能基因组学研究具有重要科学意义和应用价值。