一种基于显微图像分析的均相多重免疫检测方法

本发明公开了一种基于显微图像分析的均相多重免疫检测方法，先分别制备捕获微球和检测微球；再制备含“捕获微球‑靶标蛋白‑检测微球”的免疫复合物；免疫复合物均匀平铺在检测玻片上，使用多通道荧光显微镜，采集不同荧光微球的明场图像和暗场荧光图像；分别记录捕获微球和检测微球的中心坐标和半径；将明场图像与暗场荧光图像通过图像配准对齐，利用多模态显微共定位计算方法，计算捕获微球与检测微球之间的空间重叠关系，获得免疫复合物连接的有效信号数量；再通过标准曲线计算得到待检测靶标样本溶液中靶标蛋白的浓度。本方法采用共定位分析，实现信号逐一计数，无需依赖整体信号强度，能够实现多个靶标的同时检测及定量检测。