多重PCR检测反应中代替高温变性产生单链的方法和提高多重PCR产物液相杂交检测灵敏性和准确性的方法及配套的试剂盒

本发明公开了一种多重PCR检测反应中代替高温变性产生单链的方法和提高多重PCR产物液相杂交检测灵敏性和准确性的方法及配套的试剂盒。主要通过一条引物5’端设计修饰带有磷酸基团，从而扩增出其中一条链的一端磷酸化的PCR产物；将PCR扩增产物用Lambda核酸外切酶进行消化处理，完全去掉一端带有磷酸化的DNA链，得到单链。本发明代替普通多重PCR检测反应高温变性产生单链的方法，消除了DNA复性对探针与靶序列杂交的负面影响，提升杂交效率，提高了液体芯片技术平台在应用分子检测应用中的准确性和灵敏性。