反向酶联免疫吸附检测方法

本申请公开了反向酶联免疫吸附检测方法，属于生物医学检测技术领域。包括以下步骤：步骤1，对生物样本进行离心过滤和梯度稀释，同时准备未偶联的特异性抗体/抗原和双酶标记二抗，优化试剂配比以确保最佳活性；步骤2，使待测样本与特异性抗体/抗原竞争结合，加入双酶标记二抗与未被占据的抗体/抗原结合位点结合，形成酶标复合物；步骤3，加入纳米磁性粒子，通过施加脉冲磁场促进复合物的高效捕获，形成完整免疫复合物；步骤4，利用梯度磁场分离免疫复合物，收集上清液相中未结合的酶标二抗的液相，并采用时间分辨荧光‑比色双模式检测其酶活性；步骤5，结合样本特异性校正因子精确计算目标抗原/抗体浓度；步骤6，生成标准化检测报告。