确定RNA的三维结构中的RNA体外转录和纯化及RNA折叠方法

本发明公开了一种确定RNA的三维结构中的RNA体外转录和纯化及RNA折叠方法，包括以下步骤：S1,RNA体外转录和纯化：线性化的DNA模板通过聚合酶链反应或质粒扩增后进行酶切制备，其中可以引入额外的核酶序列和引物修饰，以确保5'和3'末端的序列一致性；使用T7RNA聚合酶或其突变体在优化的条件下进行体外转录，以获得最大产量和均一性；通过变性凝胶电泳快速评估RNA的均一性，而折叠状态通过体外的非变性凝胶电泳进行评估；共转录折叠的RNA通过缓冲液交换直接浓缩或通过尺寸排阻色谱法进行纯化，以分离不同的构象；如果IVT产物存在异质性，则需要进行传统的变性凝胶纯化和在适当条件下的RNA再折叠。S2,RNA折叠条件筛选：非变性凝胶电泳筛选RNA的折叠条件或高通量筛选体外转录和RNA折叠条件的nanoDLS。本发明帮助实现cryo‑EM结构测定，并辅以cryo‑EM数据处理流程，以解析RNA动态和构象变化，以及RNA建模算法，以生成基于中等到高分辨率cryo‑EM密度图的原子坐标。