布鲁氏菌效应蛋白BspE基因缺失株的构建方法及应用方法

本发明属于但不限于基因工程技术技术领域，公开了一种布鲁氏菌效应蛋白BspE基因缺失株的构建方法及应用，利用同源重组及SacB反向筛选技术构建BspE基因缺失株，以牛种布鲁氏菌A19疫苗株菌液为模板，PCR扩增得到BspE基因上、下游同源臂，将胶回收的BspE基因上、下游同源臂进行融合PCR扩增，将获得的融合片段与pUC19‑SacB质粒进行连接、转化，获得重组质粒pUC19‑ΔBspE。将该质粒电转化至牛种布鲁氏菌A19感受态细胞，经卡那抗性及蔗糖压力筛选，PCR鉴定及测序，所得阳性转化子即为牛种布鲁氏菌BspE缺失株，该缺失疫苗毒株提高了抗菌细胞因子及特异性布鲁氏菌抗体IgG的水平，是一种新型的布鲁氏菌候选减毒疫苗毒株，具有较好的市场前景。