含有非天然氨基酸的腈水解酶突变体、编码基因、重组载体、重组菌株及其应用

本发明涉及生物工程技术领域，具体包括含有非天然氨基酸的腈水解酶突变体，其特征在于：所述腈水解酶突变体包括下列突变方式之一：（1）将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列第340位的脯氨酸突变为L‑(7‑羟基香豆素‑4‑基)乙基甘氨酸；（2）将SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列第367位的脯氨酸突变为L‑(7‑羟基香豆素‑4‑基)乙基甘氨酸；（3）将SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列第314位的脯氨酸突变为L‑(7‑羟基香豆素‑4‑基)乙基甘氨酸。本发明通过建立高通量筛选模型，构建大容量突变体文库，在起始酶基础上引入了非天然氨基酸进行酶修饰，成功筛选出具有高活性和稳定性的腈水解酶突变体NIT‑P340G‑Hco，其全细胞酶活是原始型腈水解酶的15.84倍，从而在提高了酶稳定性的同时也增强了酶的活性。