一种利用CRISPR筛选Th17细胞异质性的调节因子的高通量方法

本发明公开了一种利用CRISPR筛选Th17细胞异质性的调节因子的高通量方法，涉及CRISPR筛选技术领域，该方法包括如下步骤：CRISPR文库构建；Il17aCreRosa26YFP/Cas92D2T细胞转导；体内移植与EAE模型构建；单细胞转录组测序与单细胞CRISPR筛选。本发明利用CRISPR‑Cas9技术的高通量能力显著提升筛选效率，提高Th17细胞异质性调控转录因子检出的可能性和准确率：利用Il17aCreRosa26YFP/Cas92D2细胞，其中IL‑17a‑Cre的表达控制YFP和CAS9的表达，确定YFP+、Thy1.1+细胞是sgRNA转导的Th17细胞，因此，只有YFP+、Thy1.1+、Th17或ex‑Th17细胞中的基因才会被编辑，从而提高筛选的特异性和效率，并且可选用不同范围sgRNA文库，覆盖全基因或者转录因子范围，通过体内实验模型更接近真实免疫环境，结果更具生物学意义，可为自身免疫疾病的诊断和治疗提供全新的靶点和干预策略。