摘要
本发明公开了一种基于RNA双代谢标记的单细胞时间转录组测序方法,包括如下步骤:(1)获得6sG和4sU双代谢标记的单细胞;(2)将标记并固定后的细胞与编码微球一同装载到双层微孔阵列芯片上,裂解细胞,解离出的RNA被编码微球捕获;(3)将该编码微球进行TimeLapse chemistry处理;(4)将步骤(3)所得的物料依次进行反转录、cDNA扩增、文库构建和测序后,进行生物信息学分析以识别突变标记;(5)对于每种细胞的状态或细胞类型,根据携带G‑to‑A突变的reads比例下降的曲线来计算RNA降解速率,根据携带T‑to‑C突变的reads比例上升的曲线来推导RNA合成速率。本发明通过结合6sG和4sU双脉冲标记技术与高通量单细胞测序,实现了在单细胞水平上对RNA合成和降解动态的同步测量。
技术关键词
转录组测序方法
编码微球
微孔阵列芯片
乙二胺四乙酸
溶液
高通量单细胞
醋酸钠
标记技术
鸟苷
曲线
培养基
文库
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