一种感染柯萨奇病毒A16型的小鼠模型及其构建方法

本发明公开一种感染柯萨奇病毒A16型的小鼠模型及其构建方法，具体步骤为把Rosa26位点的左同源臂LHA连接到质粒pCAG‑GFP‑N1上，成功构建出质粒pCAG‑GFP‑N1‑Rosa26 LHA。然后使用高保真酶PCR扩增Rosa26‑RHA和hSCARB2片段以及wpre‑polyA片段；再使用Hind3进行酶切并回收大片段作为连接载体备用，最后使用Gibson Assembly一步法将三个片段成功构建到载体上，即获得我们所需要的目的载体：pmRosa26‑CAG‑hSCARB2。然后将目的载体和靶向sgRNA、Cas9 mRNA混合，共注射于C57小鼠受精卵中，随后移植入假孕ICR母鼠的输卵管，最终获得hSCARB2定点（Rosa26）敲入小鼠。通过颅内注射CVA‑16病毒，其结果证实该敲入鼠在10日龄，21日龄、30日龄均能成功感染CVA‑16病毒，并且该模型首次出现了后肢麻痹及死亡等严重现象，为疫苗评价和药物筛选提供了一个有力的工具。