一种用于增强CAR-NK细胞肿瘤靶向性的基因修饰方法

本发明公开了一种用于增强CAR‑NK细胞肿瘤靶向性的基因修饰方法，涉及基因修饰技术领域，包括采用生物信息学工具分析及体外展示技术对特定肿瘤抗原进行筛选和优化，得到高度特异性和高亲和力的单链抗体片段；采用基因工程技术将高度特异性和高亲和力的scFv序列整合到CAR结构中，并在NK细胞表面高效表达，得到CAR‑NK细胞；采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对CAR‑NK细胞进行趋化因子受体基因的导入，得到CAR‑NK细胞基因组；基于CAR结构，设计并构建携带多个不同抗原识别单元，通过基因工程手段将其整合到CAR‑NK细胞基因组中，得到多靶点攻击策略CAR‑NK细胞；采用体外实验和动物模型对多靶点攻击策略CAR‑NK细胞进行功能验证，验证后得到优化的CAR‑NK细胞。