摘要
本发明属于生物基因工程技术领域,具体涉及用于鲫鱼水生拉恩菌OmpA基因沉默株构建及抗病免疫中的应用。本发明通过RNA干扰和同源重组技术成功构建了水生拉恩菌OmpA沉默株,发现该基因沉默的细菌生长速度明显加快,运动能力和生物被膜形成能力增强,细胞黏附能力下降,并且感染致死率明显降低。通过梯度离心法分离纯化鲫头肾巨噬细胞,利用互作转录组技术揭示了沉默株显著诱导宿主巨噬细胞免疫和基因表达水平,有效促进了鱼体的抗病免疫机制,可用于制备水生拉恩菌弱毒苗。同时,发现OmpA在病原菌‑宿主互作致病中具有重要作用,与炎症免疫相关信号通路有密切关系。本发明水生拉恩菌病的免疫预防和疫苗制备提供了理论依据和新思路。
技术关键词
OmpA基因
T细胞受体
生物基因工程技术
PCR技术
T4DNA连接酶
体外研究模型
基因沉默效率
连续密度梯度
引物
同源重组技术
离心法
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抗病机制
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