摘要
本发明涉及了一种基于液相芯片的多靶标基因检测方法,包括以下步骤:S1、靶标基因,选择各O型血清抗原合成关键基因;S2、探针设计,针对7种血清型抗原合成关键基因,设计特异性引物对;S3、Luminex微球编码和偶联,使用不同荧光编码的MagPlex微球,通过羧基氨基偶联法将探针固定至微球表面;S4、多重PCR扩增与杂交检测;S5、数据分析算法,设定阈值:阴性对照MFI均值+3×标准差为Cutoff值;阳性判定:某血清型对应微球MFI值≥Cutoff且信噪比(S/N)≥5。通过采用上述技术方案,本方法基于Luminex液相芯片技术,通过多重PCR扩增靶标基因序列,结合微球编码探针杂交及生物素‑链霉亲和素信号放大系统,实现对大肠埃希氏菌7种血清型的高通量特异性检测。
技术关键词
基因检测方法
靶标
数据分析算法
引物
液相芯片技术
生物素
二甲基氨基丙基
编码
大肠埃希氏
DNA聚合酶
探针互补
链霉亲和素
偶联方法
荧光微球
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