一种牦牛耳成纤维永生化细胞系及其构建方法

本发明公开了一种牦牛耳成纤维永生化细胞系及其构建方法，涉及生物技术领域。本发明包括两部分优化：(1)优化胶回收过程：在胶回收时添加终浓度为0.2‑0.5mol/mL的β‑葡聚糖，有效解决现有技术中因胶回收缓冲液pH值不合适、洗涤过度、洗脱不充分等导致的基因降解和回收率低的问题，显著提高目的片段的回收质量和效率。(2)改良冻存液：在传统冻存液(胎牛血清：DMSO＝9：1)基础上，添加终浓度为0.1‑1.0mol/mL的海藻糖酶抑制剂，降低DMSO对细胞的毒性影响，减少细胞内物质外泄，稳定细胞膜通透性，保障细胞内信号传导通路正常运行，从而提升细胞复苏存活率，维持细胞正常的生长、增殖和分化功能。