基于CRISPRCas9的小鼠TCF15条件性基因敲除模型及其构建方法

本发明公开了基于CRISPR/Cas9的小鼠TCF15条件性基因敲除模型的构建方法，属于基因工程技术领域，包括以下步骤：1)设计四条sgRNA，分别为sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3和sgRNA4，其中sgRNA1和sgRNA2靶向TCF15基因第二外显子的5'端和3'端非编码区，sgRNA3和sgRNA4靶向bHLH结构域保守序列；2)配制电转液，由Cas9mRNA、所述四条sgRNA和电转缓冲液组成；3)对小鼠受精卵进行电转处理；4)将电转处理后的受精卵培养至囊胚期；5)对培养所得囊胚进行基因型鉴定。本发明通过开发新型sgRNA组合策略及优化受精卵电转体系，实现：受精卵发育至囊胚率提升至≥85％(较传统方法提高3倍)；基因编辑效率≥85％；脱靶率控制在≤1.5％；为研究TCF15在小鼠早期胚胎三胚层分化中的动态调控机制提供可靠的工具模型。